過氧化氫酶活性測定（高錳酸鉀滴定法）
過氧化氫酶普遍存在于植物的所有組織中，其活性與植物的代謝強度及抗寒、抗病能力有一定關系，故常加以測定。
一、原理???過氧化氫酶（catalase）屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中起傳遞電子的作用，過氧化氫則既是氧化劑又是還原劑?？筛鶕﨟2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶活力大小。在反應系統中加入一定量（反應過量）的過氧化氫溶液，經酶促反應后，用標準高錳酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多余的過氧化氫。即可求出消耗的H2O2的量。
?二、材料、儀器設備及試劑??????
（一）材料：小麥葉片??????
（二）儀器設備：1.?研缽；2.?三角瓶；3.?酸式滴定管；4.?恒溫水??；5.?容量瓶。??????
（三）試劑：1.?10%H2SO4；2.?0.2?mol/L?pH7.8磷酸緩沖液；3.?0.1mol/L?高錳酸鉀標準液稱：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷卻蒸餾水配制成1000ml，再用0.1mol/L?草酸溶液標定；4.?0.1mol/L?H2O2市售30%H2O2大約等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀釋至1000ml，用標準0.1mol/L?KMnO4溶液（在酸性條件下）進行標定；5.?0.1mol/L?草酸：稱取優級純H2C2O4.2H2O?12.607g，用蒸餾水溶解后，定容至1000ml。
三、實驗步驟??????
（一）酶液提?。喝⌒←溔~片2.5g加入pH7.8的磷酸緩沖溶液少量，研磨成勻漿，轉移至25ml容量瓶中，用該緩沖液沖洗研缽，并將沖洗液轉至容量瓶中，用同一緩沖液定容，4000rpm離心15min，上清液即為過氧化氫酶的粗提液。??????
（二）取50ml三角瓶4個（兩個測定，另兩個為對照），測定瓶加入酶液2.5ml，對照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml?0.1mol/L?H2O2，同時計時，于30℃恒溫水浴中保溫10min，立即加入10%H2SO42.5ml。??????用0.1mol/L?KMnO4標準溶液滴定，至出現粉紅色（在30min內不消失）為終點。
四、結果計算??????
酶活性用每g鮮重樣品1min內分解H2O2的mg數表示：?
過氧化氫酶活性（H2O2mg/g/min）＝（A－B）×VT/(W×VS×1.7×t)?
式中：A對照KMnO4滴定ml數；B酶反應后KMnO4滴定ml數；VT提取酶液總量（ml）；
VS反應時所用酶液量（ml）；W樣品鮮重（g）；t反應時間（min）；
1.71ml 0.1mol/L? KMnO4相當于1.7mg H2O2。
過氧化氫酶的活性測定
在植物體中，?黃素氧化酶類的代謝產物常包含H2O2，如光呼吸中的乙醇酸氧化酶、呼吸 作用中的葡萄糖氧化酶、氨基酸氧化酶、醛氧化酶等。H2O2的積累可導致破壞性的氧化作用， 而過氧化物酶和過氧化氫酶則可以清除H2O2，?是植物體內重要的活性氧清除系統之一。其活 性還與植物的抗逆性有密切關系，本實驗利用高錳酸鉀滴定法測定過氧化氫酶活性。
一、原理：過氧化氫酶屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧， 在此過程中起傳遞電子的作用，H2O2則既是氧化劑，又是還原劑。
R(Fe+2)＋H2O2=====R(Fe+3OH-)2
R(Fe+3OH-)2＋H2O2===R(Fe+2)2＋2H2O＋O2
合并上式：2H2O2====2H2O＋O2
據此，可根據H2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶活力大小。
在反應系統中加入一定量（反應過量）?的過氧化氫溶液，經酶促反應后，用標準高錳酸 鉀溶液（在酸性條件下）滴定多余的過氧化氫。
5H2O2＋2KMnO4＋4H2SO4→5O2＋2KHSO4＋8H2O＋2MnSO4
即可求出消耗的H2O2量。
二、儀器和用具：研缽、三角瓶50cm3×4、鐵架、酸式滴定管、恒溫水浴、容量瓶
三、試劑：
10％H2SO4；0.2mol/l磷酸緩沖液pH7.8；
0.1mol/l高錳酸鉀標準液： 3.1605gKMnO4 (AR) 用新煮沸的蒸餾水配制成1000ml， 用 0.1mol/l的草酸溶液標定；
0.1mol/l H2O2： 市售30％H2O2大約等于17.6mol/l， 取30％H2O2溶液5.68ml稀釋至 1000ml，用標準0.1mol/l KMnO4溶液（在酸性條件下）進行標定。
四、方法：
1. 酶液提?。?取小麥葉片2.5g加入pH7.8的磷酸緩沖液少量，研磨成勻漿，轉移至25ml 容量瓶中，將研缽沖洗干凈，沖洗液轉移至容量瓶中，并用同一緩沖液定容，4000rpm離心， 上清液即為過氧化氫酶粗提液。
2. 取50ml三角瓶4個 （兩個測定兩個對照） ， 測定加入酶液2.5ml， 對照為煮死酶液 2.5ml； 再加入2.5ml 0.1mol/l H2O2，同時計時間，于30℃恒溫水浴中保溫10分鐘，立即加 入10％H2SO4 2.5ml。
3. 用0.1mol/l KMnO4標準溶液滴定H2O2，至出現粉紅色（在30分鐘內不消失）為終點。
4. 結果計算： 酶活性用每克鮮重樣品在10分鐘內分解H2O2的毫克數表示：
(A-B)*Vt/V1*1.7 酶活（酶分解的H2O2 mg/g鮮重）＝------------------- W 式中： Ａ-----對照用KMnO4 ml數 Ｂ-----酶反應后KMnO4滴定ml數 Ｖt----酶液總量ml Ｖ1----反應所用酶液量ml Ｗ-----樣品鮮重(g) 1.7----1ml 0.1mol/l KMnO4相當于1.7mg H2O2 [注意]．所用KMnO4溶液及H2O2溶液使用前要經過標定，0.1mol/l H2O2要新配制。
